茶树ISSR-PCR反应体系的建立

通过优化影响茶树ISSR．PCR的主要参数，确立了适用于茶树的ISSR反应体系和扩增条件。结果表明在20μl反应体系中，模板DNA、引物、Mg^++、dNTP和TaqDNA聚合酶五种主要成分的最适浓度分别为10ng、150nmol／L、1．5mmol／L、150gmol／L、0．5U。在扩增过程中，引物的适宜退火温度比其Tm值平均高4．5℃，扩增出足量产物至少需要30个热循环。利用该优化反应体系和扩增条件，对13份不同茶树种质资源进行ISSR-PCR扩增，扩增产物的多态性为77．6％。引物TRI18构建的ISSR指纹图谱，可以区分13份茶树资源中的12份，分辨率达92．3％。

完成机构：中国农业科学院茶叶研究所，农业部茶叶化学工程重点实验室，浙江杭州310008