茶香楼

茶氨酸生物合成工程菌构建

发表于:2024-12-23 作者:茶香楼
编辑最后更新 2024年12月23日,通过PCR扩增E.coli DH5a的γ-ggt基因,产物经纯化后用Kpn I和Xho I双酶切,回收γ-谷氨酰转肽酶基因目的片断,并与经相同双酶切的表达载体pET-32a连接,得到重组质粒pET-G
通过PCR扩增E.coli DH5a的γ-ggt基因,产物经纯化后用Kpn I和Xho I双酶切,回收γ-谷氨酰转肽酶基因目的片断,并与经相同双酶切的表达载体pET-32a连接,得到重组质粒pET-GGT。将重组质粒转化到E.coli BL21中,获得工程菌。工程菌株经0.05mol/L IPTG,32℃诱导表达,湿菌体的酶活达到2.0U/g,大约是出发菌株E.coli DH5a的15倍。工程菌催化L-谷氨酰胺和盐酸乙胺反应生成茶氨酸的产量达到29.40g/L,L-Gln的转化率为48.22%,其催化L-谷氨酰胺和盐酸乙胺反应生成茶氨酸的能力比出发菌株E.coli DH5a提高了100多倍。

完成机构:农业部茶叶化学工程重点实验室、中国农业科学院茶叶研究所,浙江杭州310008

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