儿茶酚双加氧酶基因大肠杆菌表达体系研究

从恶臭假单孢菌(Pseudomonas sp．S-47)的DNA中扩增得到924bp编码儿茶酚双加氧酶的基因片段，将其构建入pBluescriptSK载体BamHI和SacI位点间。测序结果显示与Kim(2000)报道一致。将该基因插入带庆大霉素抗性基因启动子和tlt2终止子载体pG251、分别带ompA和EAP信号肽、lpp和Gm′启动子载体pYF395和pYF5254中，构建组成型表达载体pG251，分泌型表达载体pYFX1，pYFX2。酶活测定结果显示pG251为665mu／mL，pYFX1，pYFX2分别为1815mu/mL，1015mu／mL。SDS-PAGE电泳显示表达蛋白产物的分子量约为35kD。分泌型表达载体pYFX1表达量大于pYFX2，组成型表达载体pGX1由于使用弱启动子表达量较低。

完成机构：[1]上海市农业遗传育种重点实验室，上海201106 [2]上海市农业科学院农业生物技术研究中心，上海201106