茶树黄酮醇合成酶基因的克隆与原核表达

本研究采用EST测序技术和RT-PCR技术，获得了一个茶树茶多酚代谢中的重要基因--黄酮醇合成酶（FLS）基因，在GenBank登录（GenBank accession No．EF205150），其序列全长1317bp，其中开放阅读框长996bp，编码331个氨基酸，3]端有一个明显的多聚腺苷酸加尾信号，推测的蛋白分子量约为37．5kD，理论等电点为5．80。序列分析表明它与葡萄FLS基因序列的亲缘关系比较近。将该基因重组到表达载体pET-32a（＋）中进行原核表达，经IPTG诱导、SDS-PAGE检测，结果表明茶树黄酮醇合成酶基因能在大肠杆菌BL21中表达，电泳检测到一条大约61kD的外源蛋白，与预测的融合蛋白分子量相符。用Ni-NTA亲和层析柱对融合蛋白进行纯化，得到了纯度在90%以上的纯化蛋白，为进一步研究PET-FLS融合蛋白的活性及功能奠定了基础。

完成机构：中国农业科学院茶叶研究所茶树资源与改良研究中心,国家茶树改良中心,杭州310008