茶树咖啡碱合酶cDNA在大肠杆菌中的表达
发表于:2024-09-22 作者:茶香楼
编辑最后更新 2024年09月22日,通过RT-PCR法扩增出茶树咖啡碱合酶(TCS)cDNA编码区全序列,并将其克隆到表达载体pET32a(+)中,得到重组质粒pET-TCS,在表达宿主菌B121trxB(DE3)中高效表达,产生相对分
通过RT-PCR法扩增出茶树咖啡碱合酶(TCS)cDNA编码区全序列,并将其克隆到表达载体pET32a(+)中,得到重组质粒pET-TCS,在表达宿主菌B121trxB(DE3)中高效表达,产生相对分子质量约为62000的融合蛋白。该融合蛋白包括112个氨基酸残基的硫氧还原蛋白及370个氨基酸残基的茶树TCS蛋白。实验结果表明,随着诱导时间的延长,表达的融合蛋白产量逐渐增加,表达蛋白总量最高可达到菌体总蛋白的39.14%;在15、25和37℃ 3个不同的诱导温度下,均能诱导产生融合蛋白,而且产生的总量及其可溶性部分所占比例均随诱导温度升高而增加;在菌体的各个部位中,融合蛋白主要在细胞质中以可溶的形式进行表达,有少量在外周质中表达或以包涵体形式在细胞质中表达。另外,体外酶促反应表明,表达的融合蛋白能催化可可碱甲基化生成咖啡碱,具有正常的生物学活性。
完成机构:[1]安徽农业大学农业部茶叶生物化学和生物技术重点开放实验室,安徽合肥230036 [2]安徽省教育学院,安徽合肥230061
蛋白
安徽
诱导
生物
咖啡
咖啡碱
茶树
中表
农业
形式
总量
氨基
氨基酸
温度
细胞
细胞质
合肥
实验
不同
产量
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