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油茶ISSR反应体系建立及优化

发表于:2024-12-23 作者:茶香楼
编辑最后更新 2024年12月23日,以改进的CTAB高盐法提取油茶嫩叶总DNA,进行简单重复序列间扩增(ISSR)分析,分别测试了退火温度、模板DNA浓度、Mg^2+浓度.dNTPs浓度,TaqDNA聚合酶用量和是否加入去离子甲酰胺对反
以改进的CTAB高盐法提取油茶嫩叶总DNA,进行简单重复序列间扩增(ISSR)分析,分别测试了退火温度、模板DNA浓度、Mg^2+浓度.dNTPs浓度,TaqDNA聚合酶用量和是否加入去离子甲酰胺对反应结果的影响.油茶ISSR分析的最适反应体系为t在20μL PCR反应体积中.含20ng模板DNA,2.5mmol·L^-1MgCl2,0.2mmol·L^-1dNTPs·1UTaqDNA聚合酶,0.5pmol·μL^-1引物.1%去离子甲基酰胺,扩增程序为,94℃预变性2min;94℃变性30π,52℃退火30s,72℃延伸90s.反应38个循环;最后在72℃延伸7min.

完成机构:江西省植物生物技术重点实验室,江西南昌330032

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