鹧鸪茶ISSR—PCR反应体系优化的研究

通过单因素试验研究了大戟科野桐属植物鹧鸪茶ISSR-PCR反应体系中的主要影响因子．经过优化实验，建立了一套稳定的鹧鸪茶ISSR-PCR反应体系：10×buffer2．5μL，1．5～3．0mmol·L^-1 MgCl2,50～300μmol·L^-1 dNTPs，Taq酶2．5～3．0U，引物0．3～0．6μmol·L^-1，DNA模板80-160ng．最后用无菌超纯水补足至25μL.PCR扩增程序为：94℃预变性4min，然后按94℃变性40s，52～54℃退火45s．72℃延仲120s．进行40个循环。最后72℃延伸8min；16℃保存．该反应条件可应用于鹧鸪茶不同居群间亲缘关系和遗传多样性分析．

完成机构：[1]海南大学热带生物资源教育部重点实验室,海南海口570228 [2]海南大学苦丁茶研究所,海南海口570228