几种茶叶多糖对佐剂性关节炎大鼠免疫指标的影响

张运芳金涌李俊汪东风徐叔云

摘要目的研究几种不同提取途径的茶叶多糖(tps)对佐剂性关节炎(aa)大鼠免疫指标的影响。方法采用aa大鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞体外培养技术研究几种tps对其功能的影响。结果几种茶叶多糖提高aa大鼠过低的脾淋巴细胞增殖反应和il-2趋势，其中p2途径提取的tps对脾淋巴细胞增殖反应和il-2具有明显的促进作用(p<0.05)；对aa大鼠腹腔巨噬细胞产生过高的il-1，几种不同途径提取的tps均有降低趋势，以p2茶叶多糖的作用最显著(p<0.05)。结论p2tps对aa大鼠免疫指标具有明显的调节作用。

主题词关节炎，佐剂性；茶叶/化学；多糖类/药理学

中图分类号r282.71；r684.3；r332

文献标识码a文章编号1000-1492(2000)01-0027-03

effectsoftpsonimmuneindexofratswithadjuvantarthritis

zhangyunfang,jinyong,lijunetal

(instituteofpharmacology,anhuimedicaluniversity,hefei230032)

abstractobjectivetostudytheeffectoftps(teapoly-saccharides)extractedbydifferentmethodsonimmunefunctionofratswithaa.methodsusingculturedspleenlymphocyteandperitonealmacrophage(pmΦ)invitroforstudingtheeffectoftpsonitsaction.resultsallofthetpstrendedtoincreasethelowerlevelofspeenlymphocyteproliferativereactionandil-2inratswithaa.p2ofthetpscouldenhancemarkedly(p<0.05).allofthetpscoulddecreasethehigherlevelofil-1producedbypmΦinratswithaaandp2ofthetpscouldalsodecreasemarkedly(p<0.05).conculsionpchinatea2mayhavemarkedlyimmunoregulatoryeffectsonimmuneindexofratswithaa.

mesharthritis,adjuvant;foliumcamelliae/chemistry;polysaccharides/pharmacology

茶叶为山茶科植物，其药用价值历史悠久。随着对茶叶成分、药理作用的深入研究，发现茶叶的医疗作用范围广泛。茶叶能提高人体免疫机能，这作用可能与茶叶多糖免疫调节有关〔1～3〕。为了解茶叶多糖(teapolysaccharides,tps)的免疫调节作用。本文观察了不同提取途径的tps对佐剂性关节炎大鼠免疫指标的影响。

1材料和方法

1.1材料sd大鼠，体重200g±20g本校实验动物中心提供(皖医动准字002)；cona、lps，美国sigma公司产品；p1、p2、p3、p4、p5水提醇沉，采用不同方法精制的多糖，分子量约7000，由安徽农业大学茶叶系提供；fj-2107型液体闪烁仪，西安262厂生产。

1.2方法

1.2.1cfa的制备参照文献〔1〕将同一批号的bcg80℃1h灭活，以高压灭菌的液体石蜡配成10g.l-1的乳剂，置4℃冰箱备用。

1.2.2大鼠aa的制备选取?大鼠，体重180g±20g，于每鼠左足跖皮内注射0.1ml致炎。

1.2.3cona诱导的大鼠脾淋巴细胞增殖健康茶反应〔4〕用rpmi-1640培养液常规制备大鼠细胞悬液(1010.l-1)，在96孔培养板上，每孔加入100μl脾淋巴细胞悬液(终浓度5×109.l-1)、50μl5种tps(p1、p2、p3、p4、p5)(终浓度100μmol.l-1)、50μlcona(3mg.l-1)，终容积为200μl，各设3个复孔，置37℃，5%co2培养箱中培养48h，终止培养前6h，每孔加入20μl3h-tdr(7.4×103bq.孔-1)，用多头细胞收集器收集细胞于69型纤维滤纸上，用液闪仪测定cpm值，以3个复孔的均值表示结果。

1.2.4il-2的产生与检测〔5〕以rpmi-1640培养液常规制备大鼠脾细胞悬液(1010.l-1)，在24孔培养板上，每孔加入0.5ml上述脾细胞悬液(终浓度为5×109.l-1)，0.25mlcona(终浓度为3mg.l-1)和0.25ml几种不同的tps(终浓度100μmol.l-1)置37℃、5%co2培养箱中培养24h后，离心(2000r.min-1，10min)收集上清，即为il-2活性的上清液，-20℃保存待测。参照文献〔4〕制备cona活化的小鼠脾细胞，用以测定il-2活性。在96孔培养板上，每孔加入不同稀释度的il-2待测上清，每一稀释度设3个复孔，然后加入100μl活化的小鼠脾细胞悬液。置37℃，5%co2培养箱培养24h，终止培养前6h加入20μl3h-tdr，培养结束后，用多头细胞收集器收集细胞69型纤维滤纸上，用液闪仪测定放射性，结果以3个复孔的cpm均值表示。

1.2.5il-1的产生与检测〔6〕以rpmi-1640培养液常规制备大鼠腹腔巨噬细胞悬液(2×109.l-1)，加入24孔培养板，每孔1ml，置37℃，5%co2培养箱中培育2h，弃去培养液，并以5%nbs-dulecco?s洗3遍，除去非粘附细胞，获单层mΦ，然后每孔加入lps0.5ml(终浓度6mg.l-1)和0.5ml几种不同tps(终浓度100μmol.l-1)，置37℃，5%co2培养箱中培养48h，收集上清即含il-1活性的上清液，-20℃保存待测。参照文献〔5〕，用小鼠胸腺细胞增殖法检测il-1，用正常c57bl/6j小鼠，无菌取胸腺制成不同浓度。于96孔培养板上，每孔加入不同稀释度的上清100μl，每一稀释度设3个复孔，加入50μl胸腺细胞悬液和50μlcona(终浓度为3mg.l-1)，置37℃，5%co2培养箱中培养48h，终止培养前6h，每孔加入20μl3h-tdr，培养结束后收集细胞用液闪仪测定放射性，以3个复孔的cpm均值表示结果。

2结果

2.1tps对cona诱导的aa大鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响表1所示，aa大鼠脾细胞增殖反应明显降低，而体外给予几种tps(100mg.l-1)对aa大鼠过低的脾淋巴细胞增殖反应均有不同程度的恢复作用，其中p2tps能显著提高aa大鼠脾淋巴细胞增殖反应(p<0.05)。

表1tps对cona诱导的大鼠脾淋巴细胞

增殖反应的影响(±s,n=8)